Transfekcijski reagensi dolaze s unaprijed optimiziranim protokolom i spremni za upotrebu, što osigurava visoku učinkovitost transfekcije, vrhunsku održivost stanica i povećane titre virusnih vektora te podršku od istraživanja i razvoja do proizvodnje.
Proizvodnja virusnih vektora za CGT
Upotreba visokokvalitetnih transfekcijskih reagensa ključna je za proizvodnju virusnih vektora za staničnu i gensku terapiju (eng. "Cell and Gene Therapy", CGT), ekonomičnost procesa i industrijsku skalabilnost. Visoka produktivnost u proizvodnji AAV i LV smanjuje troškove proizvodnje poboljšavajući dostupnost terapije.
FectoVIR® -AAV i FectoVIR® -LV, dizajnirani za proizvodnju velikih razmjera, nude nizak volumen kompleksacije, dugu stabilnost i visoku ponovljivost, osiguravajući učinkovite i dosljedne rezultate u usporedbi sa zlatnim standardom, PEIpro®, koji je i dalje dostupan. Transfekcijski reagensi GMP kvalitete, proizvedeni u skladu sa smjernicama ICH Q7 i podržani sveobuhvatnom regulatornom dokumentacijom, jačaju usklađenost i osiguranje kvalitete. Nadalje, ublažavanje rizika ojačano je sveobuhvatnim uslugama ispitivanja reziduala i izjavama o toksičnosti, osiguravajući sigurnost pacijenata.
Proizvodnja proteina
Tranzijentna proizvodnja rekombinantnih proteina ili monoklonskih antitijela važan je korak u istraživanju za proučavanje ponašanja proteina od interesa u stanicama, probir i odabir kandidatskih proteina u ranim fazama terapijskog istraživanja te omogućavanje modulacije molekularnog mehanizma u mnogim drugim područjima primjene.
FectoPRO® transfekcijski reagens posebno je dizajniran za proizvodnju proteina u stanicama sisavaca. FectoPRO® nudi gotova, isplativa rješenja prilagođena učinkovitoj proizvodnji proteina u staničnim linijama HEK-293 i CHO, osiguravajući nesmetan i učinkovit tijek rada za istraživačke potrebe.
Istraživanje znanosti o životu
Istražite širok asortiman Sartorius gotovih transfekcijskih reagensa prikladnih za većinu primarnih stanica i staničnih linija sisavaca, kao i gotove plazmide, koji omogućuju učinkovita istraživanja u području genske ekspresije, uređivanja genoma i RNA interferencije:
- jetPRIME® osigurava visoku učinkovitost transfekcije DNA i izvrsno utišavanje gena
- jetOPTIMUS® reagens za poboljšanje učinkovitosti transfekcije DNK u teško transfektiranim stanicama
- INTERFERin ® postiže preko 90% utišavanja gena u širokom rasponu stanica
- jetMESSENGER® za mRNA transfekciju u primarnim stanicama, staničnim linijama raka, neuronima i matičnim stanicama
- jetPEI® idealan je za automatizirane ili ručne visokopropusne tijekove rada za probir
- PULSin® snažan je i učinkovit reagens za isporuku proteina, antitijela i peptida u stanice sisavaca
Često postavljana pitanja
Znanstvenici se oslanjaju na transfekciju kao moćnu tehniku za modulaciju ekspresije gena u eukariotskim stanicama in vitro i in vivo. Transfekciju mogu koristiti istraživači na sveučilištima ili istraživačkim institutima, kao i inženjeri u biotehnološkim ili farmaceutskim tvrtkama.
Transfekcija je proces koji omogućuje egzogenim nukleinskim kiselinama da zaobiđu staničnu membranu i uđu u stanice. Egzogene nukleinske kiseline koje se obično koriste su plazmidna DNA, RNA, siRNA i oligonukleotidi. Nakon što se dostave u stanice, nukleinske kiseline moduliraju ekspresiju gena potičući prekomjernu ekspresiju ili utišavanje gena od interesa.
Prekomjerna ekspresija gena nezamjenjiv je alat za:
- razumijevanje uloge gena (studije gena, visokopropusni probir)
- proizvodnju bioloških lijekova poput antitijela (proizvodnja proteina) i rekombinantnih virusnih čestica
- terapijske svrhe - proizvodnja virusa za gensku i staničnu terapiju
Utišavanje gena je metoda koja se koristi za sprječavanje ekspresije gena od interesa. Ekspresija gena može se djelomično smanjiti (knockdown gena) ili potpuno blokirati (nokaut gena). Budući da se potencijalno može ciljati bilo koji gen, utišavanje gena je prevladavajuća tehnika koja se koristi za razvoj terapija temeljenih na genima za rješavanje monogenskih patologija, raka i u strategijama imunoterapije.
Transfekcija nukleinskih kiselina koristi se za privremeno ili stabilno modificiranje stanica prekomjernom ekspresijom ili utišavanjem specifičnih gena. Za provođenje transfekcije može se koristiti nekoliko metoda koje se općenito dijele u dvije različite kategorije: kemijske i fizičke. Postoji nekoliko fizičkih metoda, kao što su elektroporacija, sonoporacija ili mikroinjektiranje, ali ti su procesi složeni i relativno toksični za stanice sisavaca. Kemijski posredovana transfekcija izvrsna je alternativa zbog jednostavnog korištenja, visoke učinkovitosti transfekcije i izvrsne stanične održivosti. Kemijska transfekcija se obično izvodi korištenjem kationskih polimera ili lipida koji će zaštititi anionske nukleinske kiseline.
1. Inkapsulacija genetskog materijala s transfekcijskim reagensom
Nukleinske kiseline su negativno nabijene zbog svog polifosfatnog lanca i stoga mogu stupiti u interakciju s pozitivno nabijenim transfekcijskim reagensima (polimerima ili lipidima). To rezultira stvaranjem transfekcijskih kompleksa ili nanočestica koje štite nukleinske kiseline od razgradnje posredovane nukleazama.
2. Stanična apsorpcija nanočestica
Većina stanica eksprimira negativno nabijene proteoglikane heparan sulfata na vanjskoj površini stanične membrane, s kojima pozitivno nabijeni transfekcijski kompleksi mogu stupiti u interakciju. Ova interakcija ključna je za pokretanje stanične apsorpcije putem procesa endocitoze.
3. Otpuštanje u citosol i transport u jezgru radi transkripcije po potrebi
Nakon staničnog unosa, transfekcijski kompleksi se sekvestriraju u unutarstanične vezikule. Naši transfekcijski reagensi mogu inducirati otpuštanje nukleinskih kiselina u citoplazmu putem rupture ili fuzije membrane vezikula. Većina nukleinskih kiselina (oligonukleotidi, siRNA, mRNA itd.) ostaje u citoplazmi gdje je aktivna. U slučaju prijenosa gena, plazmidna DNA se transportira u jezgru radi prolazne ekspresije) koja može postati trajna nakon integracije genoma (stabilna ekspresija).
