Faktori rasta i citokini igraju ključnu ulogu u istraživanju matičnih stanica, utječući na diferencijaciju, proliferaciju i preživljavanje manipuliranjem staničnim ponašanjem i usmjeravanjem diferencijacije u specifične loze. Inducirane pluripotentne matične stanice (iPSC) relativno su novo područje stanične terapije i zbog svoje fleksibilnosti nose jedan od najširih terapijskih potencijala. Održavanje pluripotentnosti iPSC-a bez potrebe za dnevnim hranjenjem čini ih idealnim za različita istraživačka područja.
Faktori rasta i citokini igraju ključnu ulogu u istraživanju matičnih stanica, utječući na diferencijaciju, proliferaciju i preživljavanje manipuliranjem staničnim ponašanjem i usmjeravanjem diferencijacije u specifične loze. Inducirane pluripotentne matične stanice (iPSC) relativno su novo područje stanične terapije i zbog svoje fleksibilnosti nose jedan od najširih terapijskih potencijala. Održavanje pluripotentnosti iPSC-a bez potrebe za dnevnim hranjenjem čini ih idealnim za različita istraživačka područja.
Razvoj mozga i patofiziologija su vrlo složeni, dinamični procesi koji uključuju međudjelovanje brojnih citokina i faktora rasta. Neuroznanstvena istraživanja su izazovna i zahtijevaju translacijske in vitro modele, poput ljudskih staničnih linija, neuralnih matičnih stanica ili tipova stanica izvedenih iz iPSC-a, koji su robusni, neperturbirajući i mogu reproducibilno rekapitulirati željeni fenotip.
Slike 1, 2 i 3: iPSC stanice uzgajane su bez zamjene medija tijekom 5 dana u različitim uvjetima koristeći faktor rasta NutriStem® hPSC XF Growth Factor (GF)-Free medij, uz dodatak Sartorius rekombinantnog TGF-β1 PLUS proteina (2 ng/mL) i FGF2-G3 proteina (50–200 ng/mL), termostabilne varijante FGF-2. Stupčasti dijagrami prikazuju ekspresiju markera nakon 5 dana uzgoja, analizirani na iQue® sustavu za ekspresiju SSEA-1 i održavanje pluripotentnog fenotipa.
Točkasti dijagrami generirani u iQue Forecyt® softveru prikazuju razliku u ekspresiji SSEA-1 kod iPSC stanica suplementiranih Sartorius rekombinantnim FGF2-G3 proteinom.
Snimke zabilježene pomoću Incucyte® sustava za analizu živih stanica (dan 2) prikazuju promjene u morfologiji i rastu povezane s različitim testiranim uvjetima medija. iPSC stanice tretirane RPMI medijem korištene su kao kontrola za gubitak pluripotentnosti, a THP-1 stanice kao kontrola za nepluripotentni stanični tip.
Slika 4 i 5: Kvantifikacija izrastanja neurita i ekspresije površinskih antigena stanica tijekom diferencijacije SH-SY5Y stanica. SH-SY5Y stanice diferencirane su postupnim smanjivanjem koncentracije seruma i sekvencijalnim dodavanjem retinoične kiseline i Sartorius® humanog rekombinantnog BDNF-a.
Diferencijacija je provedena u prisutnosti Incucyte® Fabfluor-488 protutijela kompleksiranog s neuronskim markerom CD56 ili IgG kontrolom te Opti-Green sredstva za suzbijanje pozadinske fluorescencije. Snimke su zabilježene pomoću Incucyte® sustava za analizu živih stanica.
SH-SY5Y stanice razvile su zreo neuronski fenotip unutar 14 dana (HD faza i fluorescentne slike), a kvantifikacija je pokazala da BDNF inducira učinak ovisan o koncentraciji na izrastanje neurita i ekspresiju CD56 u usporedbi s kontrolom (medij bez seruma).