Primjena citokina i faktora rasta
Istraživanja matičnih stanica
Faktori rasta i citokini igraju ključnu ulogu u istraživanju matičnih stanica, utječući na diferencijaciju, proliferaciju i preživljavanje manipuliranjem staničnim ponašanjem i usmjeravanjem diferencijacije u specifične loze. Inducirane pluripotentne matične stanice (iPSC) relativno su novo područje stanične terapije i zbog svoje fleksibilnosti nose jedan od najširih terapijskih potencijala. Održavanje pluripotentnosti iPSC-a bez potrebe za dnevnim hranjenjem čini ih idealnim za različita istraživačka područja.
Slika 1
Slika 2
Slika 3
Slike 1, 2 i 3: iPSC stanice uzgajane su bez zamjene medija tijekom 5 dana u različitim uvjetima koristeći NutriStem® hPSC XF Growth Factor (GF)-Free medij, uz dodatak Sartorius rekombinantnog TGF-β1 PLUS proteina (2 ng/mL) i FGF2-G3 proteina (50–200 ng/mL), termostabilne varijante FGF-2. Stupčasti dijagrami prikazuju ekspresiju markera nakon 5 dana uzgoja, analizirani na iQue® sustavu za ekspresiju SSEA-1 i održavanje pluripotentnog fenotipa.
Točkasti dijagrami generirani u iQue Forecyt® softveru prikazuju razliku u ekspresiji SSEA-1 kod iPSC stanica suplementiranih Sartorius rekombinantnim FGF2-G3 proteinom.
Snimke zabilježene pomoću Incucyte® sustava za analizu živih stanica (dan 2) prikazuju promjene u morfologiji i rastu povezane s različitim testiranim uvjetima medija. iPSC stanice tretirane RPMI medijem korištene su kao kontrola za gubitak pluripotentnosti, a THP-1 stanice kao kontrola za nepluripotentni stanični tip.
Neuroznanost
Razvoj mozga i patofiziologija su vrlo složeni, dinamični procesi koji uključuju međudjelovanje brojnih citokina i faktora rasta. Neuroznanstvena istraživanja su izazovna i zahtijevaju translacijske in vitro modele, poput ljudskih staničnih linija, neuralnih matičnih stanica ili tipova stanica izvedenih iz iPSC-a, koji su robusni, neperturbirajući i mogu reproducibilno rekapitulirati željeni fenotip.
Slika 4
Slika 5
Slika 4 i 5: Kvantifikacija izrastanja neurita i ekspresije površinskih antigena stanica tijekom diferencijacije SH-SY5Y stanica. SH-SY5Y stanice diferencirane su postupnim smanjivanjem koncentracije seruma i sekvencijalnim dodavanjem retinoične kiseline i Sartorius® humanog rekombinantnog BDNF-a. Diferencijacija je provedena u prisutnosti Incucyte® Fabfluor-488 protutijela kompleksiranog s neuronskim markerom CD56 ili IgG kontrolom te Opti-Green sredstva za suzbijanje pozadinske fluorescencije. Snimke su zabilježene pomoću Incucyte® sustava za analizu živih stanica. SH-SY5Y stanice razvile su zreo neuronski fenotip unutar 14 dana (HD faza i fluorescentne slike), a kvantifikacija je pokazala da BDNF inducira učinak ovisan o koncentraciji na izrastanje neurita i ekspresiju CD56 u usporedbi s kontrolom (medij bez seruma).
Citokini i faktori rasta za istraživačku upotrebu
Visokokvalitetni faktori rasta i citokini namijenjeni isključivo za istraživačku upotrebu (RUO) proizvode se tehnologijom rekombinantne DNA i ne sadrže nikakve komponente ili onečišćujuće tvari životinjskog podrijetla.
Često postavljana pitanja
Faktori rasta i citokini dodaju se staničnim kulturama kako bi potaknuli proliferaciju i održali stanice u željenom stanju reguliranjem proliferacije i diferencijacije.
Faktori rasta i citokini su vrste signalnih molekula koje igraju ključnu ulogu u regulaciji rasta, diferencijacije i funkcije stanica. Široko se koriste u istraživanjima, predkliničkim studijama i kliničkim ispitivanjima za proučavanje različitih bioloških procesa i razvoj novih tretmana za bolesti. Glavna razlika između područja samo za istraživačku upotrebu, predkliničkih i GMP područja je u kvaliteti i dokumentaciji potrebnoj za njihovu proizvodnju i upotrebu.
Faktori rasta i citokini isključivo za istraživačku upotrebu (RUO) proizvode se za upotrebu u osnovnim istraživanjima i nisu namijenjeni za dijagnostičke ili terapijske primjene. Obično se proizvode standardnim laboratorijskim postupcima i možda ne zadovoljavaju stroge zahtjeve kvalitete potrebne za kliničku upotrebu. Često se koriste u akademskim istraživanjima ili komercijalnim primjenama kao što su otkrivanje lijekova, probir i identifikacija ciljeva.
Preklinički faktori rasta i citokini CellGenix® namijenjeni su za upotrebu u ranoj fazi razvoja staničnih i genskih terapija. Proizvode se pod istim uvjetima kao i CellGenix® GMP faktori rasta i citokini, korištenjem identičnih proizvodnih koraka i ekspresijskih sustava. To osigurava jednaku kvalitetu i performanse proizvoda te omogućuje nesmetan prijelaz pri prelasku na faktore rasta i citokine GMP kvalitete. Naša predklinička kvaliteta stoga nudi isplativu alternativu za predkliničku fazu kada regulatorna podrška i kvaliteta sirovina imaju niži prioritet, a pristup dokumentaciji relevantnoj za GMP još nije potreban.
CellGenix® GMP faktori rasta i citokini proizvode se pod strogim uvjetima u skladu s relevantnim GMP i globalnim smjernicama kako bi se zadovoljili najviši standardi kvalitete i sigurnosti za upotrebu u kliničkim ispitivanjima i konačno u liječenju pacijenata. Razlika u odnosu na CellGenix® predklinički je u tome što nudimo regulatornu podršku i sveobuhvatnije QC testiranje, uključujući strože specifikacije i dokumentaciju.
Ukratko, glavna razlika između citokina samo za istraživačku uporabu, predkliničke i GMP kvalitete je u razini kontrole kvalitete i dokumentacije te njihovoj namjeni.
RUO stupanj - namijenjeno za osnovna istraživanja
Predklinička kvaliteta - namijenjeno za predkliničku ex vivo upotrebu
GMP kvaliteta - namijenjeno za ex vivo upotrebu u kliničkim ispitivanjima i komercijalnoj proizvodnji ATMP-a
Naši liofilizirani proteini stabilni su na sobnoj temperaturi 3 dana ili zamrznuti do 2 godine (na -20 °C ili -80 °C). Nakon rekonstitucije, rekombinantni proteini mogu se čuvati na 4 °C 1-2 tjedna ili zamrznuti do godinu dana, iako se preporučuje zamrzavanje alikvota i odmrzavanje za jednokratnu upotrebu, kako bi se osigurala maksimalna stabilnost i aktivnost proteina.
Iako se ulaže svaki napor kako bi se osigurala sterilnost dostavljenih uzoraka, preporučujemo sterilno filtriranje nakon razrjeđivanja u mediju ili konačnoj radnoj otopini.
Budući da svaka vrsta stanica ima različite zahtjeve, optimalna koncentracija faktora rasta ili citokina mora se empirijski odrediti za svaki sustav kulture. Koristite preliminarne eksperimente za promatranje koncentracije i vremenski ovisne reakcije stanica na faktore rasta te odaberite najprikladniju koncentraciju za svoju primjenu.
Molimo vas da pogledate tehnički list proizvoda (dostupan putem QR koda na bočici ili na mysartorius.com → certificates) za preporuku otopine za resuspenciju vašeg faktora rasta ili citokina. Prije rekonstitucije, kratko centrifugirajte kako biste osigurali da je sav prah na dnu bočice. Dodajte otopinu za rekonstituciju tako da koncentracija proteina bude između 0,5 i 1 mg/ml. Ostavite da odstoji 1 minutu prije nježnog miješanja – nemojte koristiti vrtložiti otopinu (to bi uzrokovalo pjenjenje, koje treba izbjegavati). Iz master otopine možete pripremiti zalihe u alikvotima ili bočice za jednokratnu upotrebu.
Sartoriusovi RUO faktori rasta i citokini isporučuju se na sobnoj temperaturi jer su liofilizirani, što ih čini stabilnima u širokom rasponu temperatura.
Na bočici vašeg proizvoda nalazi se QR kod koji će vas izravno odvesti na portal My Sartorius gdje se možete prijaviti i pristupiti svim certifikatima za svoj proizvod, ili zatražite certifikate na sartorius@sartorius.hr.
Da, naši faktori rasta i citokini ne sadrže nosače proteina, stoga se mogu dodati po potrebi i kompatibilni su s vašim radom.