Nova EP 2.6.7 regulativa: Što se mijenja u detekciji mikoplazme i kako ostati usklađen?

Zašto je detekcija mikoplazme toliko važna?

Mikoplazme su jedan od najopasnijih i najteže uočljivih kontaminanata u bioprocesnoj proizvodnji. Za razliku od bakterija i gljivica, ne detektiraju se standardnim testovima sterilnosti jer ne rastu na uobičajenim hranjivim podlogama i ne uzrokuju vidljivo zamućenje podloge.

Posljedice kontaminacije mikoplazmom su ozbiljne:

• direktan utjecaj na kvalitetu biofarmaceutskih proizvoda
• rizik za sigurnost pacijenata
• troškovi povlačenja serija i ponovne validacije.

Upravo zato, EP 2.6.7, kao harmonizirani regulatorni okvir, osigurava konzistentnost i povjerenje u testiranje na mikoplazmu diljem industrije.

Što donosi nova EP 2.6.7 (12.2.)?

NAT metode postaju ravnopravne kulturi

Najvažniji pomak u revidiranoj EP 2.6.7 je formalno priznanje nuklearnih amplifikacijskih tehnika (NAT) - uključujući PCR metode - kao ekvivalenta tradicionalnoj kultivaciji stanica indikatora.

Do sada su brzi mikrobiološki testovi temeljeni na PCR-u bili dopušteni kao alternativa, ali bez jasno definiranih kriterija za dokazivanje ekvivalentnosti. Nova regulativa to mijenja:

• NAT metode dobivaju vlastiti regulatorni okvir unutar poglavlja
• definirani su eksplicitni kriteriji izvedbe za studije usporedivosti
• naglašene su prednosti: kraće vrijeme analize i sposobnost detekcije i kultivabilnih i nekultivabilnih mikoplazmi.

Ovaj razvoj usklađen je s paralelnim napretkom u SAD-u - USP trenutno razvija nacrt poglavlja USP <77>: Mycoplasma Nucleic Acid Amplification Tests.

Novi limit detekcije: CFU i GC jedinice

Središnji tehnički zahtjev revizije odnosi se na granicu detekcije (LOD). PCR metoda namijenjena zamjeni kulture mora zadovoljiti:

≤ 10 CFU/mL ili < 100 genomskih kopija (GC)/mL.

Zašto se uvodi GC jedinica?

Jedan mikroorganizam može sadržavati više kopija genoma. Klasična CFU mjera (colony-forming units) opisuje broj živih, kultivabilnih organizama - ali PCR detektira nukleinske kiseline, bez obzira na kultivabilnost. Uvođenjem GC jedinice dobivamo standardizirani referentni okvir koji omogućuje smislenu usporedbu između NAT i kultivacijskih metoda.

Uz to, nova regulativa propisuje i:

GC:CFU omjer mora biti manji od 10 za referentne preparate.

Ovo je ključni parametar koji vaš tim mora uzeti u obzir pri odabiru i validaciji referentnih standarda.

Prošireni panel referentnih vrsta

Validacijski panel sada mora odražavati mikoplazma vrste realno povezane s biološkim podrijetlom sirovina i vašeg sustava proizvodnje.

Jači naglasak na procesnoj kontroli

Revizija uvodi jasnije zahtjeve za nadzor cijelog analitičkog toka:

1. Vanjski kontrolni uzorci dodaju se prije ekstrakcije (kad god je moguće) - kako bi se pratila ekstrakcija, amplifikacija i potencijalna inhibicija. 
2. Testirati i staničnu frakciju i supernatant - mikoplazme se mogu vezati uz stanice, što testiranje samo supernatanta može propustiti.
3. Formalna procjena specifičnosti metode prema filogenetski srodnim, ali ne-mikoplazma bakterijama.

Sve validacije provedene prema EP 2.6.7 (01/2008) i dalje su valjane — pod uvjetom da su odobrene prije 1. travnja 2026.

Za sve nove validacije i revalidacije, primjenjuju se zahtjevi nove EP 2.6.7 (12.2.). Naš tim pruža sveobuhvatnu podršku kroz validacijske usluge za biofarmaceutsku industriju.

Koristite Microsart® standarde?

Microsart® AMP test za otkrivanje mikoplazme bio je u potpunoj usklađenosti s EP 2.6.7 (01/2008). Međutim, unakrsna validacija s novom dPCR metodom kvantifikacije pokazuje više GC vrijednosti — što znači da Microsart® 10 CFU standardi više ne zadovoljavaju zahtjeve revidirane EP 2.6.7 (12.2.).

Microsart® kits ostaju dostupni za laboratorije koji nastavljaju raditi prema starim standardima, no za sve buduće validacije prema novoj regulativi, preporučujemo tranziciju na Cyclus® generaciju. 

Cyclus® - portfelj dizajniran za novu EP 2.6.7

Sartorius je razvio Cyclus® kao direktan odgovor na promijenjene regulatorne zahtjeve. Svaki element portfolija ciljano adresira jedan ili više novih zahtjeva.

Cyclus® Bead Extraction

Izolacija nukleinskih kiselina magnetskim kuglicama umjesto klasičnih silika spin kolona. Kompatibilno s manualnim i automatiziranim protokolima (KingFisher™ Flex), prilagođeno za visok throughput bez kompromisa u preciznosti.

Više informacija o novom Cyclus® portfelju proizvoda, bit će objavljeno uskoro.

Checklist: 5 koraka za usklađenost s novom regulativom EP 2.6.7

1. Pregledajte datume validacija - jesu li provedene prije ili poslije 1. travnja 2026.?
2. Procijenite referentni panel - uključuje li sve vrste relevantne za vaš sustav, uključujući M. salivarium?
3. Provjerite GC:CFU omjer vaših referentnih standarda - mora biti manji od 10.
4. Uvedite vanjske kontrole prije ekstrakcije u rutinske protokole
5. Planirajte tranziciju na Cyclus® standarde za sve validacije prema novim zahtjevima.

Revizija EP 2.6.7 formalno potvrđuje ono što industrija već zna: molekularne metode su budućnost testiranja na mikoplazmu. Za laboratorije u farmaceutskoj i biotehnološkoj industriji, ovo nije samo usklađenost s regulativom — to je prilika za modernizaciju workflow-a i jačanje povjerenja u QC procese.

Imate pitanja o tranziciji? Kontaktirajte nas putem kontakt forme ili nam pišite na sartorius@sartorius.hr.