Transfekcijski reagenti so dobavljeni s predhodno optimiziranim protokolom in pripravljeni za uporabo, kar zagotavlja visoko učinkovitost transfekcije, vrhunsko celično vitalnost ter povišane titre virusnih vektorjev, s podporo od raziskav in razvoja do proizvodnje.
Proizvodnja virusnih vektorjev za CGT
Uporaba visokokakovostnih transfekcijskih reagentov je ključna za proizvodnjo virusnih vektorjev za celično in gensko terapijo (angl. "Cell and Gene Therapy", CGT), stroškovno učinkovitost procesa in industrijsko skalabilnost. Visoka produktivnost pri proizvodnji AAV in LV zmanjšuje stroške proizvodnje ter izboljšuje dostopnost terapije.
FectoVIR®-AAV in FectoVIR®-LV, zasnovana za proizvodnjo v velikem obsegu, omogočata nizek volumen kompleksacije, dolgo stabilnost in visoko ponovljivost, kar zagotavlja učinkovite in dosledne rezultate v primerjavi z zlatim standardom PEIpro®, ki je še vedno na voljo. GMP-kakovostni transfekcijski reagenti, proizvedeni v skladu s smernicami ICH Q7 in podprti z obsežno regulativno dokumentacijo, okrepijo skladnost in zagotavljanje kakovosti. Poleg tega zmanjševanje tveganj podpirajo celostne storitve testiranja ostankov in izjave o toksičnosti, kar zagotavlja varnost pacientov.
Proizvodnja proteinov
Prehodna proizvodnja rekombinantnih proteinov ali monoklonskih protiteles je ključen korak pri raziskavah za proučevanje obnašanja ciljanih proteinov v celicah, presejanju in izbiri kandidatskih proteinov v zgodnjih fazah terapevtskega razvoja ter pri modulaciji molekularnih mehanizmov na številnih drugih področjih uporabe.
FectoPRO® transfekcijski reagent je posebej zasnovan za proizvodnjo proteinov v sesalskih celicah. FectoPRO® ponuja pripravljene, stroškovno učinkovite rešitve za učinkovito proizvodnjo proteinov v celičnih linijah HEK-293 in CHO ter zagotavlja nemoten in učinkovit delovni potek za raziskovalne potrebe.
Raziskave ved o življenju
Raziščite širok nabor Sartoriusovih pripravljenih transfekcijskih reagentov, primernih za večino primarnih celic in sesalskih celičnih linij, ter pripravljenih plazmidov, ki omogočajo učinkovite raziskave na področju genske ekspresije, urejanja genoma in RNA interferenc:
- jetPRIME® omogoča visoko učinkovitost DNA transfekcije in odlično utišanje genov
- jetOPTIMUS® izboljšuje učinkovitost transfekcije DNK v težko transfektabilnih celicah
- INTERFERin® doseže več kot 90 % utišanje genov v širokem spektru celic
- jetMESSENGER® je namenjen mRNA transfekciji v primarnih celicah, rakavih celičnih linijah, nevronih in matičnih celicah
- jetPEI® je idealen za avtomatizirane ali ročne visoko-pretočne delovne tokove za presejanje
- PULSin® je močan in učinkovit reagent za dostavo proteinov, protiteles in peptidov v sesalske celice
Pogosto zastavljena vprašanja
Znanstveniki se zanašajo na transfekcijo kot na močno tehniko za modulacijo izražanja genov v evkariontskih celicah in vitro in in vivo. Transfekcijo lahko uporabljajo raziskovalci na univerzah ali raziskovalnih inštitutih, pa tudi inženirji v biotehnoloških ali farmacevtskih podjetjih.
Transfekcija je postopek, ki omogoča vnos eksogenih nukleinskih kislin v celice mimo celične membrane. Najpogosteje uporabljene eksogene nukleinske kisline so plazmidna DNA, RNA, siRNA in oligonukleotidi. Ko so enkrat dostavljene v celice, te kisline modulirajo izražanje genov z vzpodbujanjem prekomernega izražanja ali utišanjem ciljanega gena.
Prekomerno izražanje genov je nepogrešljivo orodje za več namenov:
razumevanje vloge genov (genske študije, visokozmogljivostno testiranje)
proizvodnja bioloških zdravil, kot so protitelesa (proizvodnja beljakovin) in rekombinantni virusni delci
terapevtske uporabe – proizvodnja virusov za gensko in celično terapijo
Utišanje genov je metoda, ki se uporablja za preprečevanje izražanja določenega gena. Izražanje gena se lahko delno zmanjša (»knockdown« gena) ali popolnoma onemogoči (»knockout« gena). Ker je mogoče ciljati praktično kateri koli gen, je utišanje genov prevladujoča tehnika za razvoj genskih terapij, namenjenih zdravljenju monogenskih bolezni, raka in pri strategijah imunoterapije.
Transfekcija nukleinskih kislin se uporablja za začasno ali trajno spremembo celic z namenom prekomernega izražanja ali utišanja določenih genov. Za izvedbo transfekcije obstaja več metod, ki jih na splošno delimo v dve glavni kategoriji: kemične in fizikalne. Obstajajo številne fizikalne metode, kot so elektroporacija, sonoporacija ali mikroinjekcija, vendar so ti postopki zapleteni in razmeroma toksični za sesalske celice. Da bi se izognili tem težavam, kemično posredovana transfekcija ponuja odlično alternativo: enostavnost uporabe, visoka učinkovitost in dobra celična preživetvenost. Kemična transfekcija se običajno izvaja z uporabo kationskih polimerov ali lipidov, ki zaščitijo anionske nukleinske kisline.
1. Inkapzulacija genetskega materiala s transfekcijskim reagentom
Nukleinske kisline so zaradi svojih polifosfatnih verig negativno nabite, zato lahko tvorijo interakcije s pozitivno nabitimi transfekcijskimi reagenti (polimeri ali lipidi). To vodi v nastanek transfekcijskih kompleksov ali nanočestic, ki ščitijo nukleinske kisline pred razgradnjo z nukleazami.
2. Celična absorpcija nanočestic
Večina celic na zunanji površini celične membrane izraža negativno nabite heparan sulfatne proteoglikane, s katerimi lahko pozitivno nabiti transfekcijski kompleksi interagirajo. Ta interakcija je ključna za sprožitev celične absorpcije preko endocitoze.
3. Sproščanje v citosol in po potrebi prenos v jedro za transkripcijo
Po vnosu v celico se transfekcijski kompleksi ujamejo v znotrajcelične vezikle. Naši transfekcijski reagenti lahko povzročijo sproščanje nukleinskih kislin v citoplazmo z razpadom ali fuzijo membran veziklov. Večina nukleinskih kislin (oligonukleotidi, siRNA, mRNA itd.) ostane aktivna v citoplazmi. V primeru prenosa genov se plazmidna DNA prenese v jedro, kjer lahko pride do prehodnega izražanja, ki lahko postane trajno po integraciji v genom (stabilno izražanje).
